重组蛋白在生物医学领域的应用广泛,主要以冻干粉和溶液态两种形式进行保存。通过原核细胞表达的重组蛋白通常以冻干粉的形式存在,而真核细胞表达的重组蛋白则采用溶液状态保存。这样的保存方式确保了重组蛋白在-80℃下可稳定存储数年,具备良好的稳定性。
在使用冻干粉之前,必须进行溶解,而溶解的方法至关重要,若处理不当可能会降低蛋白的活性。对于溶液态保存的重组蛋白,在冻融稀释过程中也需要谨慎,这些问题在实际应用中非常常见。
一、原核细胞表达的重组蛋白
比如,从大肠杆菌中表达得到的冻干重组蛋白,经过包涵体提纯后,通常添加蛋白保护剂,并使用经过过滤的无菌水作为复溶剂。在复溶过程中,将100微克的冻干蛋白加入86微升超纯水中,并轻轻摇晃使其溶解。切忌使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃,以免影响蛋白质的功能。
二、真核细胞表达的重组蛋白
真核细胞中分泌的有活性蛋白,不仅需要经过转录和翻译,还需进行翻译后的加工,以确保蛋白质的空间折叠方式正常。因此,重组蛋白必须在诸如哺乳动物细胞等真核细胞中进行表达。这样,基因中的内含子能被正确去除,翻译后的蛋白质也能得到适当的后处理,从而保持其生物活性。我们通常采用溶液态保存,以确保蛋白质的活性和稳定性。
三、重组蛋白的保护剂
在冻干和储存的过程中,常用的保护剂或稳定剂包括多糖类、多元醇、聚合物、表面活性剂以及某些蛋白和氨基酸等。通常使用8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂,其中海藻糖能够有效防止蛋白质二级结构的改变,以及在冻干过程中造成的蛋白质伸展和聚集。而甘露醇则是一种广泛应用的冻干保护剂和填充剂,对于确保重组蛋白的稳定性至关重要。在生物医疗领域,依赖于尊龙凯时人生就博提供的高质量重组蛋白,保障了有效的研究和应用。