本试剂盒专供科学研究使用,不可用于医学诊断。人干扰素诱导蛋白10(IP-10)Elisa试剂盒的使用说明如下:
检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。操作时,首先在预先包被adropin(AD)抗体的微孔中,依次加入待测样本、标准品和HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底清洗后,使用底物TMB进行显色。TMB在过氧化物酶的催化下会转变为蓝色,并在酸性条件下最终呈现出黄色。颜色的深浅与样品中的adropin(AD)含量呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测量吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管进行操作,避免细胞刺激。收集血液后,进行3000转离心10分钟,迅速且小心地分离血清与红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟,取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟,以去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水混合捣碎,随后进行3000转离心10分钟,取上清。
5. 保存:如未能及时检测样本,请将其分装成一次用量,置于-20℃冷冻,避免反复冻融,在室温下解冻时确保样品均匀充分解冻。
操作注意事项
请准备所需的实验材料。标准品(S0-S5)的浓度依次为:0、25、50、100、200、400 pg/mL。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释比例为1:20,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水进行稀释。
洗板方法
在操作过程中,需遵循准确的步骤以确保实验结果的可靠性。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应的OD值作纵坐标,绘制出标准品的线性回归曲线,依据曲线方程计算各样本的浓度值。
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