尊龙凯时人生就博研究所的细胞培养实验旨在深入探讨细胞迁移机制。为了实现这一目标,我们按照标准细胞培养方案采用血清培养基对目的细胞进行培养。在检测前一天,细胞则被转移至无血清培养基(0.2% BSA)进行过夜培养。随后,吸出细胞培养基,并用PBS缓冲液进行冲洗,以保证细胞环境的纯净。
紧接着,我们加入胰蛋白酶溶液以启动细胞分离,并将细胞悬液转移至试管中,进行350×g离心5分钟。离心后,我们会将细胞重悬于预热的细胞培养基中,并将细胞悬浮液稀释至接种密度100,000个细胞/ml。
对于接收实验,我们向每个孔中添加200μl含或不含化学引诱剂的培养基,并将不同浓度的FCS(从0.25%到10%)引入其中。接着,将制备好的细胞悬液50μl加入膜板每个孔中,并将细胞培养板放置在37℃、5% CO2的细胞培养箱中孵育24小时。
孵育结束后,从接收板各孔中吸出培养基,并向接收孔中加入150μl无血清培养基和8μM钙黄绿素AM(已在DMSO中稀释)。我们会在37°C、5% CO2的环境中继续孵育45分钟,随后再次吸出膜板和接收板各孔中的细胞培养基并用PBS进行洗涤。
为了让膜下侧的迁移细胞开始脱离,我们在接收板中添加胰蛋白酶溶液,并轻轻摇动,孵育10分钟。最后,将每孔180μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板中,并使用激发波长为485nm、发射波长为520nm的读板器读取荧光信号。
在后续处理过程中,我们从膜板各孔吸出培养基,并使用预湿棉签去除膜上未迁移的细胞,确保数据的准确性。利用荧光显微镜在绿色通道检测膜下侧迁移细胞的荧光信号,确保对细胞形态和科技严谨性的全面监测。
尊龙凯时人生就博在寻找更好的生物标志物、治疗靶点和药物,以干预肿瘤转移、血管生成和炎症性疾病等复杂现象方面,体外细胞迁移实验是不可或缺的工具。此类实验提供了一个可控环境,用以测量细胞迁移和分析不同分子的影响,如生长因子和趋化因子。同时,对于细胞迁移实验而言,孔径的精确选择尤为重要。选择合适的孔径既要能限制细胞的被动运动,又要能促进其主动迁移,为后续的研究提供可靠的数据支持。